影片讲述了新生代蜘蛛侠迈尔斯（沙梅克·摩尔 Shameik Moore 配音）携手蜘蛛格温某男下班回家的路上想了个搞笑段子，自己觉得很搞笑，就兴冲冲跑回家里跟他老婆说。没想到他老婆一脸惊悚的看着他，该男子纳闷了，难道段子不好笑吗？这时候，衣柜里传出爆笑的声音！ （海莉·斯坦菲尔德 Hailee Steinfeld 配音），穿越多元宇宙踏上更宏大的冒险征程的故事。面临每个蜘蛛侠都会失去至亲的宿命，迈尔斯誓言打破命运魔咒，找到属于自己的英雄之路。而这个决定和蜘蛛侠2099（奥斯卡·伊萨克 Oscar Is aac 配音）所领军的蜘蛛联盟产生了极大冲突，一场以一敌百的蜘蛛侠大内战即将拉响！